DELLA-proteinoj estas konservitaj mastrajkreskoreguligilojkiuj ludas centran rolon en kontrolado de planta disvolviĝo en respondo al internaj kaj mediaj signaloj. DELLA agas kiel transkripcia regulilo kaj estas rekrutita por celi promotorojn per ligado al transkripciaj faktoroj (TF-oj) kaj histono H2A tra sia GRAS-domajno. Lastatempaj studoj montris, ke DELLA-stabileco estas post-tradukite reguligita per du mekanismoj: poliubikvitinigo induktita de la fitohormono giberelino, kiu kondukas al ĝia rapida degenero, kaj konjugacio de malgrandaj ubikvitin-similaj modifiloj (SUMO) por pliigi ĝian amasiĝon. Krome, DELLA-aktiveco estas dinamike reguligita per du malsamaj glikosiloj: la DELLA-TF-interago estas plifortigita per O-fukosiligo sed inhibiciita per O-ligita N-acetilglukozamino (O-GlcNAc) modifo. Tamen, la rolo de DELLA-fosforiligo restas neklara, ĉar antaŭaj studoj montris konfliktantajn rezultojn, intervalante de tiuj, kiuj montras, ke fosforiligo antaŭenigas aŭ reduktas DELLA-degeneron, ĝis aliaj, kiuj montras, ke fosforiligo ne influas ĝian stabilecon. Ĉi tie, ni identigas fosforiligajn lokojn en REPRESOR.ga1-3(RGA, AtDELLA) purigitaj el Arabidopsis thaliana per mas-spektrometria analizo kaj montras, ke fosforiligo de du RGA-peptidoj ĉe la regionoj PolyS kaj PolyS/T antaŭenigas H2A-ligadon kaj plifortigis RGA-aktivecon. Asocio de RGA kun celaj reklamantoj. Rimarkinde, fosforiligo ne influas RGA-TF-interagojn aŭ RGA-stabilecon. Nia studo malkaŝas la molekulan mekanismon per kiu fosforiligo induktas DELLA-aktivecon.
Por pliklarigi la rolon de fosforiligo en la reguligo de DELLA-funkcio, estas grave identigi DELLA-fosforiligajn lokojn in vivo kaj fari funkciajn analizojn en plantoj. Per afineca purigo de plantekstraktoj sekvata de MS/MS-analizo, ni identigis plurajn fosfositojn en RGA. Sub kondiĉoj de GA-manko, RHA-fosforiligo pliiĝas, sed fosforiligo ne influas ĝian stabilecon. Grave, ko-IP kaj ChIP-qPCR-analizoj rivelis, ke fosforiligo ĉe la PolyS/T-regiono de RGA antaŭenigas ĝian interagadon kun H2A kaj ĝian asociiĝon kun celaj promociantoj, rivelante la mekanismon per kiu fosforiligo induktas RGA-funkcion.
RGA estas rekrutita por celi kromatinon per la interagado de la LHR1-subdomajno kun TF kaj poste ligiĝas al H2A tra ĝia PolyS/T-regiono kaj PFYRE-subdomajno, formante la H2A-RGA-TF-komplekson por stabiligi RGA. Fosforiligo de Pep 2 en la PolyS/T-regiono inter la DELLA-domajno kaj la GRAS-domajno per neidentigita kinazo plifortigas RGA-H2A-ligadon. La rgam2A-mutacia proteino abolicias RGA-fosforiligon kaj adoptas malsaman proteinkonformacion por interrompi H2A-ligadon. Ĉi tio rezultas en malstabiligo de pasemaj TF-rgam2A-interagoj kaj disiĝo de rgam2A de cela kromatino. Ĉi tiu figuro prezentas nur RGA-mediaciitan transskriban subpremadon. Simila ŝablono povus esti priskribita por RGA-mediaciita transskriba aktivigo, escepte ke la H2A-RGA-TF-komplekso antaŭenigus celan genan transskribon kaj defosforiligo de rgam2A malpliigus transskribon. Figuro modifita de Huang et al.21.
Ĉiuj kvantaj datumoj estis statistike analizitaj per Excel, kaj signifaj diferencoj estis determinitaj per la t-testo de Student. Neniuj statistikaj metodoj estis uzitaj por antaŭe determini la specimenan grandecon. Neniuj datumoj estis ekskluditaj de la analizo; la eksperimento ne estis hazarda; la esploristoj ne estis blindaj pri la distribuo de datumoj dum la eksperimento kaj la taksado de la rezultoj. La specimengrandeco estas indikita en la figura legendo kaj la fonta datumdosiero.
Por pliaj informoj pri la studdezajno, vidu la Resumon de la Raporto pri Natura Portfolio asociita kun ĉi tiu artikolo.
Datumoj pri proteomiko de mas-spektrometrio estis kontribuitaj al la konsorcio ProteomeXchange per la partnera deponejo PRIDE66 kun la identigilo de la datumaro PXD046004. Ĉiuj aliaj datumoj akiritaj dum ĉi tiu studo estas prezentitaj en la Aldonaj Informoj, Aldonaj Datendosieroj, kaj Krudaj Datendosieroj. La fontaj datumoj estas provizitaj por ĉi tiu artikolo.
Afiŝtempo: 8-a de novembro 2024