DELLA proteinoj estas konservitaj majstrokreskreguligistojkiuj ludas centran rolon en kontrolado de plantevoluo en respondo al internaj kaj mediaj signalvortoj. DELLA funkcias kiel transkripcia reguligisto kaj estas rekrutita por celi reklamantojn per ligado al transkripcifaktoroj (TF) kaj histona H2A tra sia GRAS-domajno. Lastatempaj studoj montris ke DELLA-stabileco estas post-traduke reguligita tra du mekanismoj: poliubiquitination induktita per la fitohormona giberelino, kiu kondukas al sia rapida degenero, kaj konjugacio de malgrandaj ubiquitin-similaj modifiloj (SUMO) por pliigi ĝian amasiĝon. Krome, DELLA-agado estas dinamike reguligita per du malsamaj glikozilacioj: la DELLA-TF-interagado estas plifortigita per O-fukosilation sed inhibiciita per O-ligita N-acetilglukozamino (O-GlcNAc) modifo. Tamen, la rolo de DELLA-fosforiligo restas neklara, ĉar antaŭaj studoj montris konfliktajn rezultojn, intervalante de tiuj montrantaj ke fosforiligo antaŭenigas aŭ reduktas DELLA-degeneron al aliaj montrante ke fosforiligo ne influas ĝian stabilecon. Ĉi tie, ni identigas fosforiladejojn en REPRESSORga1-3(RGA, AtDELLA) purigita de Arabidopsis thaliana per mas-spektrometria analizo kaj montras ke fosforiligo de du RGA-peptidoj ĉe la PolyS kaj PolyS/T-regionoj antaŭenigas H2A-ligadon kaj plifortigitan RGA-agadon. Asocio de RGA kun celreklamantoj. Precipe, fosforiligo ne influas RGA-TF-interagojn aŭ RGA-stabilecon. Nia studo rivelas la molekulan mekanismon per kiu fosforiligo induktas DELLA-agadon.
Por pliklarigi la rolon de fosforiligo en reguligado de DELLA-funkcio, estas kritike identigi DELLA-fosforilejojn en vivo kaj fari funkciajn analizojn en plantoj. Per afineca purigo de plantaj ekstraktoj sekvita de MS/MS-analizo, ni identigis plurajn fosfositojn en RGA. Sub kondiĉoj de GA-manko, RHA-fosforiligo pliiĝas, sed fosforiligo ne influas ĝian stabilecon. Grave, ko-IP kaj ChIP-qPCR-analizoj rivelis ke fosforiligo ĉe la PolyS/T-regiono de RGA antaŭenigas sian interagadon kun H2A kaj ĝian asocion kun celreklamantoj, rivelante la mekanismon per kiu fosforiligo induktas RGA-funkcion.
RGA estas rekrutita por celi kromatinon tra la interagado de la LHR1-subdomajno kun TF kaj tiam ligas al H2A tra ĝia PolyS/T-regiono kaj PFYRE-subdomajno, formante la H2A-RGA-TF-komplekson por stabiligi RGA. Fosforiligo de Pep 2 en la PolyS/T-regiono inter la DELLA-domajno kaj la GRAS-domajno per neidentigita kinazo plibonigas RGA-H2A-ligadon. La rgam2A mutaciuloproteino abolicias RGA-fosforiligo kaj adoptas malsaman proteinformiĝon por malhelpi H2A-ligadon. Tio rezultigas malstabiligon de pasemaj TF-rgam2A-interagoj kaj distanciĝo de rgam2A de celkromatino. Tiu figuro prezentas nur RGA-mediaciitan transkripcian subpremon. Simila padrono povus esti priskribita por RGA-mediaciita transskriba aktivigo, krom ke la H2A-RGA-TF-komplekso antaŭenigus celgentransskribon kaj defosforiligo de rgam2A malpliigus transskribon. Figuro modifita el Huang et al.21.
Ĉiuj kvantaj datumoj estis statistike analizitaj per Excel, kaj signifaj diferencoj estis determinitaj per la t-testo de Studento. Neniuj statistikaj metodoj estis uzataj por determini la specimenan grandecon. Neniuj datumoj estis ekskluditaj de la analizo; la eksperimento ne estis hazarda; la esploristoj ne estis blindaj al la distribuado de datumoj dum la eksperimento kaj la taksado de la rezultoj. La specimena grandeco estas indikita en la figuro-legendo kaj fontodatumdosiero.
Por pliaj informoj pri la studa dezajno, vidu la Resumon pri Natura Portfolio-Raporto asociita kun ĉi tiu artikolo.
Mas-spektrometriaj proteomikodatenoj estis kontribuitaj al la ProteomeXchange-konsorcio tra la PRIDE66-partnerdeponejo kun datumaridentigilo PXD046004. Ĉiuj aliaj datumoj akiritaj dum ĉi tiu studo estas prezentitaj en la Suplementaj Informoj, Suplementaj Datumaj Dosieroj kaj Krudaj Datumaj Dosieroj. Fontaj datumoj estas provizitaj por ĉi tiu artikolo.
Afiŝtempo: Nov-08-2024