Plantaj kaj patogenaj materialoj
Populacio por mapado de sorgo-asocioj, konata kiel la sorgo-konverta populacio (SCP), estis provizita de D-ro Pat Brown ĉe la Universitato de Ilinojso (nun ĉe UC Davis). Ĝi estis priskribita antaŭe kaj estas kolekto de diversaj linioj konvertitaj al fotoperiodo-nesentemo kaj pli malgranda staturo por faciligi la kreskon kaj disvolviĝon de la plantoj en usonaj medioj. 510 linioj el ĉi tiu populacio estis uzitaj en ĉi tiu studo, kvankam pro malbona ĝermado kaj aliaj problemoj pri kvalito-kontrolo, ne ĉiuj linioj estis uzitaj en la analizo de ĉiuj tri trajtoj. Fine, datumoj de 345 linioj estis uzitaj por la analizo de la kitina respondo, 472 linioj por la flg22-respondo, kaj 456 por TLS-rezisto.B. cookeiLa trostreĉiĝo LSLP18 estis akirita de D-ro Burt Bluhm ĉe la Universitato de Arkansaso.
MAMP-respondmezurado
Du malsamaj MAMP-oj estis uzitaj en ĉi tiu studo flg22, (Genscript-katalogo n-ro RP19986), kaj kitino. Sorgoplantoj estis kultivitaj en enmetaĵoj metitaj sur ebenaĵoj plenaj de grundo (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) en la forcejo. Plantoj estis akvumitaj la tagon antaŭ provaĵkolekto por eviti ekstran folihumidon en la tago de kolektado.
La linioj estis hazardigitaj kaj, pro loĝistikaj kialoj, plantitaj en aroj de 60 linioj. Por ĉiu linio, tri "potoj" estis plantitaj kun du semoj por linio. Postaj aroj estis plantitaj tuj kiam la antaŭa aro estis prilaborita ĝis la tuta populacio estis taksita. Du eksperimentaj kuroj estis faritaj por ambaŭ MAMP-oj kun genotipoj re-hazardigitaj en ĉiu el la du kuroj.
ROS-analizoj estis efektivigitaj kiel antaŭe priskribite. Mallonge, por ĉiu linio, ses semoj estis plantitaj en 3 malsamaj potoj. El la rezultantaj plantidoj, tri estis elektitaj surbaze de homogeneco. Plantidoj, kiuj aspektis nekutimaj aŭ estis signife pli altaj aŭ pli malaltaj ol la plimulto, ne estis uzitaj. Kvar foliaj diskoj de 3 mm diametro estis eltranĉitaj de la plej larĝa parto de la 4-a folio de tri malsamaj 15-tagaj sorgoplantoj. Unu disko por folio de du plantoj kaj du diskoj de unu planto, kun la dua disko fariĝanta la akvokontrolo (vidu sube). La diskoj estis individue flosigitaj sur 50 µl H20 en nigra 96-puta plato, sigelitaj per aluminia sigelo por eviti eksponiĝon al lumo, kaj konservitaj je ĉambra temperaturo dum la nokto. La sekvan matenon, reakcia solvaĵo estis farita uzante 2 mg/ml kemilumineskan sondilon L-012 (Wako, kataloga numero 120-04891), 2 mg/ml krenoperoksidazon (Tipo VI-A, Sigma-Aldrich, kataloga numero P6782), kaj 100 mg/ml Kitinon aŭ 2 μM de Flg22. 50 µl de ĉi tiu reakcia solvaĵo estis aldonita al tri el la kvar putoj. La kvara puto estis imitita kontrolo, al kiu la reakcia solvaĵo ekskludante la MAMP estis aldonita. Kvar malplenaj putoj enhavantaj nur akvon ankaŭ estis inkluzivitaj en ĉiu plato.
Post aldono de la reakcia solvaĵo, la luminesko estis mezurita uzante Synergy™ 2 plurdetektan mikroplatlegilon (BioTek) ĉiujn 2 minutojn dum 1 horo. La platlegilo faras lumineskajn mezuradojn ĉiujn 2 minutojn dum tiu 1 horo. La sumo de ĉiuj 31 legaĵoj estis kalkulita por doni la valoron por ĉiu puto. La taksita valoro por la MAMP-respondo por ĉiu genotipo estis kalkulita kiel (averaĝa lumineska valoro de la tri eksperimentaj putoj - la mokputa valoro) - minus la averaĝa valoro de la blanka puta. La valoroj de la blanka puta estis konstante proksimaj al nulo.
Foliodiskoj deNicotiana benthamiana, unu alt-respondema sorglinio (SC0003), kaj unu malalt-respondema sorglinio (PI 6069) ankaŭ estis inkluzivitaj kiel kontroloj en ĉiu 96-puta plato por kvalito-kontrolaj celoj.
B. cookeipreparado kaj inokulado de inokulo
B. cookeiLa inokulo estis preparita kiel antaŭe priskribite. Mallonge, sorgograjnoj estis trempitaj en akvo dum tri tagoj, lavitaj, ŝovelitaj en 1L konusajn flakonojn kaj aŭtoklavigitaj dum horo je 15psi kaj 121 °C. La grajnoj estis poste inokulitaj per ĉirkaŭ 5 ml da mergmoligitaj micelioj el freŝa kulturo deB. cookeiLSLP18-izolaĵoj kaj lasitaj dum 2 semajnoj je ĉambra temperaturo, skuante la flakonojn ĉiujn 3 tagojn. Post 2 semajnoj, la fungo-infektitaj sorgograjnoj estis aersekigitaj kaj poste konservitaj je 4 °C ĝis kampa inokulado. La sama inokulo estis uzata por la tuta provo kaj freŝigita ĉiujare. Por inokulado, 6-10 infektitaj grajnoj estis metitaj en la spiralon de 4-5 semajnojn aĝaj sorgoplantoj. La sporoj produktitaj de ĉi tiuj fungoj iniciatis infekton en la junaj sorgoplantoj ene de semajno.
Sempreparado
Antaŭ plantado en la kampo, sorgosemoj estis traktitaj per miksaĵo de fungicido, insekticido, kaj protektilo enhavanta ~ 1% da fungicido Spirato 480 FS, 4% da fungicido Sebring 480 FS, kaj 3% da semprotektanto Sorpro 940 ES. Poste la semoj estis aersekigitaj dum 3 tagoj, kio provizis maldikan tavolon de ĉi tiu miksaĵo ĉirkaŭ la semoj. La protektilo ebligis la uzon de la herbicido Dual Magnum kiel antaŭ-aperan traktadon.
Takso de rezisto al celaj foliaj makoj
La SCP estis plantita ĉe la Centra Kultivaĵo-Esplorstacio en Clayton, Norda Karolino, la 14-an kaj 15-an de junio 2017 kaj la 20-an de junio 2018, laŭ hazarda kompleta bloka dezajno kun du eksperimentaj ripetoj en ĉiu kazo. La eksperimentoj estis plantitaj en 1,8 m da unuopaj vicoj kun 0,9 m da vicolarĝo, uzante 10 semojn por parcelo. Du bordaj vicoj estis plantitaj ĉirkaŭ la periferio de ĉiu eksperimento por malhelpi randajn efikojn. La eksperimentoj estis inokulitaj la 20-an de julio 2017 kaj la 20-an de julio 2018, kiam la sorgoplantoj estis en kreskostadio 3. Taksoj estis prenitaj laŭ skaloj de unu ĝis naŭ, kie plantoj montrantaj neniujn signojn de malsano estis taksitaj kiel naŭ kaj tute mortaj plantoj estis taksitaj kiel unu. Du taksoj estis prenitaj en 2017 kaj kvar legadoj en 2018, komencante du semajnojn post inokulado ĉiujare. sAUDPC (normigita areo sub la malsanprogreskurbo) estis kalkulita kiel priskribite antaŭe.
Afiŝtempo: 1-a de aprilo 2021