Plantaj kaj patogenaj materialoj
Sorgo-asocia mapa populacio konata kiel la sorgokonverta populacio (SCP) estis disponigita fare de d-ro Pat Brown ĉe la Universitato de Ilinojso (nun ĉe UC Davis).Ĝi estis priskribita antaŭe kaj estas kolekto de diversspecaj linioj transformitaj al fotoperiod-sensentemo kaj pli malgranda staturo por faciligi la kreskon kaj evoluon de la plantoj en usonaj medioj.510 linioj de ĉi tiu populacio estis uzitaj en ĉi tiu studo kvankam pro malbona ĝermado kaj aliaj kvalitkontrolaj aferoj, ne ĉiuj linioj estis uzitaj en la analizo de ĉiuj tri trajtoj.Finfine datumoj de 345 linioj estis utiligitaj por la analizo de la kitina respondo, 472 linioj por la flg22-respondo, kaj 456 por TLS-rezisto.B. cookeitrostreĉiĝo LSLP18 estis akirita de D-ro Burt Bluhm ĉe la Universitato de Arkansaso.
MAMP-responda mezurado
Du malsamaj MAMPoj estis uzitaj en ĉi tiu studo flg22, (Genscript-katalogo # RP19986), kaj kitino.Sorgoplantoj estis kultivitaj en enmetoj metitaj sur apartamentoj plenigitaj kun grundo (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) en la forcejo.Plantoj estis akvumataj la tagon antaŭ specimena kolekto por eviti ekstran folian humidecon en la tago de kolekto.
La linioj estis randomigitaj kaj, pro loĝistikaj kialoj, estis plantitaj en aroj de 60 linioj.Por ĉiu linio, tri "potoj" estis plantitaj kun du semoj per linio.Postaj aroj estis plantitaj tuj kiam la antaŭa aro estis prilaborita ĝis la tuta populacio estis taksita.Du eksperimentaj kuroj estis faritaj por ambaŭ MAMPoj kun gentipoj re-hazardigitaj en ĉiu el la du kuroj.
ROS-analizoj estis faritaj kiel antaŭe priskribite.Mallonge, por ĉiu linio, ses semoj estis plantitaj en 3 malsamaj potoj.El la rezultaj plantidoj, tri estis elektitaj surbaze de unuformeco.Plantidoj kiuj aspektis nekutimaj aŭ estis signife pli altaj aŭ pli mallongaj ol la plimulto ne estis uzitaj.Kvar foliaj diskoj de 3 mm en diametro estis eltranĉitaj de la plej larĝa parto de la 4-a folio de tri malsamaj 15-tagaj sorgoplantoj.Unu disko per folio de du plantoj kaj du diskoj de unu planto, kie la dua disko iĝas la akvokontrolo (vidu malsupre).La diskoj estis individue flositaj sur 50 µl H20 en nigra 96-puta plato, sigelitaj per aluminio-sigelo por eviti eksponiĝon al lumo, kaj konservitaj ĉe ĉambra temperaturo dum la nokto.La venontan matenon reagsolvo estis farita uzante 2 mg/ml kemilumineskan sondilon L-012 (Wako, katalogo numero 120-04891), 2 mg/ml benan peroksidazon (Tipo VI-A, Sigma-Aldrich, katalogo numero P6782), kaj 100 mg/ml Kitino aŭ 2 μM de Flg22.50 µl de ĉi tiu reagsolvo estis aldonitaj al tri el la kvar putoj.La kvara puto estis imita kontrolo, al kiu la reagsolvo ekskludante la MAMP estis aldonita.Kvar malplenaj putoj enhavantaj nur akvon ankaŭ estis inkluditaj en ĉiu plato.
Post aldoni la reakcian solvon, la luminesko estis mezurita per SynergyTM 2 multi-detekta mikroplata leganto (BioTek) ĉiun 2 min dum 1 horo.La teleleganto faras luminescencmezurojn ĉiujn 2 minutojn dum ĉi tiu 1 h.La sumo de ĉiuj 31 legaĵoj estis kalkulita por doni la valoron por ĉiu puto.La laŭtaksa valoro por la MAMP-respondo por ĉiu genotipo estis kalkulita kiel (averaĝa luminesca valoro de la tri eksperimentaj putoj—la imita putovaloro) -minus la meza malplena putovaloro.La malplenaj putaj valoroj estis konstante proksimaj al nulo.
Foliaj diskoj deNicotiana benthamiana, unu alta respondema sorgolinio (SC0003), kaj unu malalta respondema sorgolinio (PI 6069) ankaŭ estis inkluditaj kiel kontroloj en ĉiu 96-puta plato por kvalitkontrolceloj.
B. cookeiinokula preparado kaj inokulado
B. cookeiinokolo estis preparita kiel priskribite antaŭe.Mallonge, sorgograjnoj estis trempitaj en akvo dum tri tagoj, ellavitaj, ŝtopitaj en 1L konusajn flakojn kaj aŭtoklavigitaj dum horo je 15psi kaj 121 °C.La grajnoj tiam estis inokulitaj kun ĉirkaŭ 5 ml da macerita micelio el freŝa kulturo deB. cookeiLSLP18 izolas kaj lasas 2 semajnojn ĉe ĉambra temperaturo, skuante la flakojn ĉiujn 3 tagojn.Post 2 semajnoj, la fungoj infestitaj sorgograjnoj estis aersekigitaj kaj tiam stokitaj je 4 °C ĝis kampa inokulado.La sama inokulo estis uzata por la tuta provo kaj farita freŝa ĉiujare.Por inokulado, 6-10 infektitaj grajnoj estis metitaj en la volvaĵon de 4-5 semajnoj aĝaj sorgoplantoj.La sporoj produktitaj de tiuj fungoj iniciatis infekton en la junaj sorgoplantoj ene de semajno.
Preparado de semoj
Antaŭ ol plantado sur la kampo, sorgosemo estis traktita per miksaĵo de fungicido, insekticido kaj sekurigilo enhavanta ~ 1% Spirato 480 FS fungicido, 4% Sebring 480 FS fungicido, 3% Sorpro 940 ES-semo-sekurigilo.Tiam la semoj estis aersekigitaj dum 3 tagoj, kio disponigis maldikan tegaĵon de ĉi tiu miksaĵo ĉirkaŭ la semoj.La sekurigilo permesis la uzon de la herbicido Dual Magnum kiel antaŭ-apero traktado.
Taksado de Target Leaf Spot-rezisto
La SCP estis plantita ĉe la Central Crops Research Station en Clayton, NC la 14-15-an de junio 2017 kaj la 20-an de junio 2018 en randomigita kompleta blokdezajno kun du eksperimentaj reproduktaĵoj en ĉiu kazo.Eksperimentoj estis plantitaj en unuopaj vicoj de 1,8 m kun vicolarĝo de 0,9 m uzante 10 semojn per tereno.Du randvicoj estis plantitaj ĉirkaŭ la periferio de ĉiu eksperimento por malhelpi randefikojn.La eksperimentoj estis inokulitaj la 20-an de julio 2017 kaj la 20-an de julio 2018, en kiu punkto la sorgoplantoj estis en kreskfazo 3. Taksoj estis prenitaj sur unu ĝis naŭ skvamoj, kie plantoj montrantaj neniujn signojn de malsano estis notitaj kiel naŭ kaj tute. mortintaj plantoj estis notitaj kiel unu .Du taksoj estis prenitaj en 2017 kaj kvar valoroj en 2018 komencante du semajnojn post inokulado ĉiun jaron.sAUDPC (normigita areo sub malsano-progresa kurbo) estis kalkulita kiel priskribite antaŭe.
Afiŝtempo: Apr-01-2021